Film “Guardians of the Galaxy,” salah satu karya populer dari Marvel Studios, membawa penonton ke petualangan luar angkasa yang penuh aksi dan humor. Kisahnya dimulai pada tahun 1988, saat Peter Quill muda diculik dari Bumi oleh Yondu Udonta dan kelompok perompak luar angkasa bernama Ravagers, tepat setelah ibunya meninggal dunia. Lompat ke tahun 2014, Peter Quill, yang kini dikenal sebagai Star-Lord, beraksi di planet Morag yang terlantar. Di sana, ia mencuri sebuah Orb misterius. Namun, aksinya ini tidak berjalan mulus karena ia diserang oleh anak buah Ronan the Accuser, seorang Kree fanatik yang dipimpin oleh Korath. Quill berhasil melarikan diri dengan Orb tersebut, tetapi Yondu mengetahui pencurian ini dan memberikan hadiah bagi siapa saja yang bisa menangkap Quill. Sementara itu, Ronan juga mengirim Gamora, seorang pembunuh bayaran yang mematikan, untuk mendapatkan Orb tersebut.
Ketika Quill mencoba menjual Orb di Xandar, ibu kota Nova Empire, ia dihadang oleh Gamora yang berhasil mencuri Orb darinya. Pertarungan antara keduanya menarik perhatian dua pemburu hadiah lainnya: Rocket, seekor rakun hasil rekayasa genetika dan sibernetika yang cerdas, dan Groot, makhluk humanoid mirip pohon yang menjadi sahabat setianya. Keempatnya akhirnya ditangkap oleh Nova Corps dan dijebloskan ke penjara Kyln. Di dalam penjara, mereka bertemu dengan Drax the Destroyer, seorang tahanan yang memiliki dendam terhadap Ronan karena telah membunuh istri dan putrinya. Quill meyakinkan Drax bahwa Gamora dapat membawanya kepada Ronan. Namun, Gamora mengungkapkan bahwa ia telah berkhianat kepada Ronan karena tidak ingin Ronan menggunakan kekuatan Orb untuk tujuan jahat.
Mengetahui bahwa Gamora berencana menjual Orb kepada The Collector, Taneleer Tivan, Quill, Rocket, Groot, dan Drax memutuskan untuk bekerja sama melarikan diri dari Kyln menggunakan pesawat Quill, Milano.
Ronan, murka dengan pengkhianatan Gamora, bertemu dengan ayah angkat Gamora, Thanos, untuk membahas masalah ini. Sementara itu, kelompok Quill melarikan diri ke Knowhere, sebuah kota planet yang dibangun di dalam kepala Celestial yang sudah mati, tempat berkumpulnya para pencuri dan pedagang. Drax yang mabuk tanpa sengaja memanggil Ronan ke Knowhere. Di saat yang sama, anggota kelompok lainnya bertemu dengan Tivan. Tivan membuka Orb dan menunjukkan isinya: sebuah Batu Keabadian atau Infinity Stone, artefak dengan kekuatan tak terukur yang dapat menghancurkan siapa pun kecuali makhluk terkuat yang mampu mengendalikannya. Carina, budak Tivan, mencoba meraih Batu tersebut, tetapi malah memicu ledakan dahsyat yang menghancurkan koleksi Tivan. Ronan tiba dan dengan mudah mengalahkan Drax, sementara yang lain melarikan diri dengan pesawat. Mereka dikejar oleh pengikut Ronan, termasuk Nebula, saudara angkat Gamora. Nebula menghancurkan pesawat Gamora, meninggalkannya terombang-ambing di ruang angkasa, dan anak buah Ronan berhasil merebut Orb.
Quill menghubungi Yondu sebelum kemudian menyusul Gamora ke luar angkasa dan memberinya helmnya agar bisa bertahan hidup. Yondu datang dan menyelamatkan keduanya. Rocket, Drax, dan Groot mengancam akan menyerang pesawat Yondu untuk menyelamatkan Quill dan Gamora, tetapi Quill berhasil menegosiasikan gencatan senjata dengan menjanjikan Orb kepada Yondu. Kelompok Quill akhirnya sepakat bahwa menghadapi Ronan berarti kematian yang pasti, tetapi mereka tidak bisa membiarkan Ronan menggunakan Batu Keabadian untuk menghancurkan galaksi. Di kapal perang Ronan, Dark Aster, Ronan menanamkan Batu Keabadian ke dalam palu perangnya, mengambil kekuatannya untuk dirinya sendiri. Ia menghubungi Thanos, mengancam akan membunuhnya setelah menghancurkan Xandar terlebih dahulu. Nebula, yang membenci ayah angkatnya, bersekutu dengan Ronan.
Ravagers dan kelompok Quill bergabung dengan Nova Corps untuk menghadapi Dark Aster di Xandar. Kelompok Quill berhasil menyusup ke kapal perang tersebut dengan Milano. Ronan menggunakan palu perangnya yang telah diperkuat untuk menghancurkan armada Nova Corps. Drax berhasil membunuh Korath, dan Gamora mengalahkan Nebula, yang kemudian melarikan diri. Namun, kelompok ini kewalahan menghadapi kekuatan Ronan. Rocket kemudian menabrakkan pesawat Ravager ke Dark Aster. Dark Aster yang rusak parah jatuh ke Xandar. Groot mengorbankan dirinya untuk melindungi kelompok dari benturan. Ronan selamat dari reruntuhan dan bersiap untuk menghancurkan Xandar, tetapi Quill berhasil mengalihkan perhatiannya, memungkinkan Drax dan Rocket untuk menghancurkan palu perang Ronan. Quill meraih Batu Keabadian yang terlepas, dan bersama Gamora, Drax, dan Rocket, ia membagi beban kekuatan Batu tersebut dan menggunakannya untuk melenyapkan Ronan.
Quill memberikan Yondu sebuah wadah yang konon berisi Batu Keabadian, tetapi yang sebenarnya ia berikan kepada Nova Corps. Saat Ravagers meninggalkan Xandar, Kraglin Obfonteri berkomentar bahwa ternyata keputusan untuk tidak menyerahkan Quill kepada ayahnya sesuai kontrak adalah keputusan yang tepat. Kelompok Quill, yang kini dikenal sebagai Guardians of the Galaxy, mendapatkan catatan kriminal mereka dihapus. Quill juga mengetahui bahwa ia hanya setengah manusia, ayahnya berasal dari spesies kuno yang tidak diketahui. Quill akhirnya membuka hadiah terakhir dari ibunya, sebuah kaset berisi lagu-lagu favoritnya. Guardians pergi dengan Milano yang telah diperbaiki, bersama dengan bibit pohon Groot yang tumbuh menjadi versi bayi dari Groot.
Dalam adegan pasca-kredit, Tivan terlihat duduk di arsipnya yang hancur bersama dua koleksi hidupnya yang tersisa: seekor kosmonaut anjing dan seekor bebek antropomorfik.